适用场景
使用RT-qPCR比较不同样本或处理组的基因表达，需要确定适合本实验的归一化方案。
准备资料
实验分组、样本来源、处理条件、候选参考基因及其检测方法，以及用于代表实际实验范围的样本。
实施流程
1. 明确实验覆盖的组织、细胞状态或处理范围。
2. 从与研究条件相关的资料中整理候选内参，记录候选理由。
3. 在具有代表性的实验样本中评价候选基因表现。
4. 根据评价结果确定参考基因组合与归一化方法，保存判断依据。
5. 正式实验记录所用参考基因、计算方法及异常处理方式；条件明显变化时重新评估适用性。
关键检查点
不能因为某基因常用就默认其在所有样本中稳定。Vandesompele等的研究指出，未经充分验证的单内参可能造成明显归一化偏差，并验证了多个经过筛选的参考基因几何平均方法。[1]
应确认候选基因的检测方法本身可靠，再讨论表达稳定性，避免把检测异常误判为生物学差异。
常见问题
是否必须固定采用某两个内参？该研究提出的是筛选与评价思路，具体数量和组合应依据实验数据确定。[1]
已有文献使用某内参，能否直接沿用？可作为候选依据，仍需核对研究条件并进行适用性评价。
实验记录
样本范围____；候选基因____；检测方法____；稳定性评价____；最终组合____；归一化计算方法____。
参考资料
[1] Vandesompele J等，Accurate normalization of real-time quantitative RT-PCR data by geometric averaging of multiple internal control genes。Genome Biology，2002，3(7):RESEARCH0034。DOI 10.1186/gb-2002-3-7-research0034。
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12184808/
本文为文献方法的中文整理，不为所有实验指定统一内参组合。
资料核对日期：2026-09-12。