逆转录与cDNA制备：引物选择和反应核对

适用场景

以RNA为起点，制备用于科研PCR或qPCR的cDNA。逆转录方案应与RNA类型、目标区域及下游用途匹配。[1]

经检查的RNA、适用逆转录试剂、所选引物、无核酸酶水和配套耗材；按试剂说明准备温控设备。

1. 明确需要检测的RNA及目标区域，核对RNA输入量与试剂适用范围。

2. 选择引物策略：oligo(dT)用于带poly(A)尾的RNA；随机引物覆盖更广的RNA种类；基因特异性引物围绕指定靶标使用。[1]

3. 按产品说明配制反应，保留加样表；批次内记录输入量及处理方式。

4. 按所用酶的说明运行温度与时间程序，记录偏离说明书的调整。

5. 标记cDNA对应样本及稀释情况，按下游要求使用或保存。

不同引物策略可能影响可获得的cDNA组成，应在方案确认后保持可比较的处理方式。[1]

若后续需要区分RNA信号与DNA残留，安排不加逆转录酶的对照，并在结果中说明其用途。[2]

是否所有RNA都适合oligo(dT)？需要先确认目标RNA是否具有适用的poly(A)结构。

一个基因信号弱是否说明逆转录失败？应结合RNA情况、引物策略以及下游检测表现排查，避免只依据单个结果判定。

RNA编号____；输入量____；引物策略____；试剂与批号____；程序____；cDNA稀释倍数____。

[1] Thermo Fisher Scientific，Reverse Transcription Reaction Setup—Seven Important Considerations。

[2] Bustin SA等，MIQE 2.0，2025。DOI 10.1093/clinchem/hvaf043。

资料核对日期：2026-09-12。